ADN recombinante en la naturaleza y ADN recombinante artificial en neumonía

 ADN recombinante artificial en neumonía

Tema: Familias de la proteina de superficie PspA de Streptococcus pneumoniae. relación con serotipos y localizacion

Objetivo: Identificar las familias de PspA de aislamientos de pacientes de nuestra región y relacionarlas con los serotipos prevalentes y patologías.

Gen: PspA

Enzima de restricción: LSM12/ SKH63 y LSM12/SKH52

Enzima ligasa: 23 F

Vector: Spn ATCC R36A

Célula receptora: Cultivos de Streptococcus pneumoniae (Spn)

Método de inserción del gen: Método de transformación; Tris buffer

Método de identificación: PCR, electroforesis

ADN recombinante en la naturaleza 

Tema: Ingeniería genética o tecnología del ADN recombinante

Objetivo: Hoy es posible crear moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no presentan homología y que pueden proceder de organismos diversos. Con el uso coordinado de las enzimas de restricción y de los vectores moleculares, es posible aislar una secuencia de ADN de cualquier organismo e inserirla en el ADN de otro. Las formas vivas que han sufrido tal transformación y que contienen un ADN extraño son llamadas transgénicas.

Gen: Gen amp, Gen tet

Enzima de restricción: PstI, BamHI y SalI 

Enzima ligasa: No se especifica 

Vector: Vector híbrido 

Célula receptora: Célula bacteriana

Método de inserción del gen: Método de transformación 

Método de identificación: Electroforesis

Bibliografía: 

Società Scientifica di Nutrizione Vegetariana.  Ingeniería genética o tecnología del ADN recombinante (actualizado 29 de Julio de 2015; acceso el 26 de Mayo de 2017) Disponible en:  https://ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.html

C.Mayoral, M.Bianca, M.Baroni, R.Giani, M.Regueira, F.Zalazar. Familias de la proteína de superficie PspA de Streptococcus pneumoniae.(actualizado el 24 de junio de 2010, acceso el 13 de junio de 2015). Disponible en: http://www.scielo.org.ar/pdf/medba/v70n5/v70n5a07.pdf

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Técnica de microrray en neumonía

Tema: Los pacientes intubados que presentan traqueobronquitis o neumonía tienen patrones distintivos de expresión genética del sistema del complemento en el período previo a la infección: un estudio piloto

Objetivo: Identificar y comparar la expresión de genes VAP / IVA “firmas” utilizando microarrays de ADN de todo el genoma.

Muestra: Secreciones traqueales, sangre

Tipo de ácido nucleico a ser extraído: ARN total

Extracción de ADN

• Lisis: Sistema PAXgene Blood RNA 
• Purificación: Sistema PAXgene Blood RNA 
• Separación: Sistema PAXgene Blood RNA 

Genes a amplificar: Cyanine 3-CTP-cRNA marcado

Tipo de prueba: Microarrays de ADN

Visualización: Análisis IPA

• Desnaturalización: GeneSpring GX 11.0
• Hibridación: GeneSpring GX 11.0
• Extensión: GeneSpring GX 11.0
• Numero de ciclos: GeneSpring GX 11.0

Bibliografía: 

Loeches, Papiio, Amansa.  Intubated patients developing tracheobronchitis or pneumonia have distinctive complement system gene expression signatures in the pre-infection period: A pilot study

[actualizada el 4 de Mayo de 2012, acceso el 20 de Mayo de 2017]. Disponible en: http://www.medintensiva.org/en/intubated-patients-developing-tracheobronchitis-or/articulo/S2173572712000768/

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Prueba de PCR en neumonía

Tema: Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad

Objetivo: La detección simultánea, mediante métodos moleculares, a M. pneumoniae, C. pneumoniae y L. pneumophila en muestras respiratorias de pacientes con neumonía adquirida en la comunidad, y describir los gérmenes comunes aislados por métodos microbiológicos convencionales

Muestra: Esputo, secreción faríngea y lavado broncoalveolar 

Tipo de ácido nucleico a ser extraído: ADN bacteriano

Extracción de ADN:

• Lisis: Kit comercial Wizard Genomics
• Purificación: Kit comercial Wizard Genomics
• Separación: Kit comercial Wizard Genomics

Genes a amplificar: OMP o la proteína 60-kDa16S, rRNA.

Número de pares de bases: 352 pares de bases en M. pneumoniae, 333 pares de bases en C. pneumoniae y 233 pares de bases en L. pneumophila.

Tipo de PCR: PCR Múltiple

Visualización: Electroforesis

• Desnaturalización: Técnica de Mejuto y colaboradores
• Hibridación: 55°C y la Técnica de Mejuto y colaboradores
• Extensión: Técnica de Mejuto y colaboradores
• Numero de ciclos: Técnica de Mejuto y colaboradores

Bibliografía: 

Guillén R., Franco R., Franco L., Moraga P., Ojeda M., Russomando. Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad que concurrieron al INERAM. SCielo. (actualizado en Junio de 2012; acceso el 13 de Mayo de 2017) Disponible en: http://scielo.iics.una.py/scielo.php?pid=S1812-95282012000100004&script=sci_arttext

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Pruebas de tamizaje y confirmatorias en neumonía

Pruebas de tamizaje 

Las pruebas de tamizaje ayudan a detectar una enfermedad de manera rápida pero no con un diagnóstico definitivo. La principal prueba de tamizaje para detectar la neumonía es la radiografía de tórax, al igual que otras técnicas, como el auscultamiento, para una evaluación de signos característicos de la neumonía,  como por ejemplo la dificultad de respirar o respiración apresurada.

Pruebas confirmatorias 

Las pruebas confirmatorias se emplean para llegar a un diagnostico definitivo de la enfermedad.

En el caso de la neumonía, se puede realizar las siguientes pruebas:

Hemocultivos: Los principales agentes bacterianos que se asocian con la neumonía son Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, y Klebsiella pneumoniae. Al igual se puede realizar un cultivo de líquido pleural si hay presencia de rodeando a los pulmones. También se puede hacer una tinción de Gram y cultivo de esputo para buscar estas bacterias o virus que están causando los síntomas.

Tomografía computarizada del tórax: Es un método imagenológico que utiliza rayos X para crear imágenes trasversales del tórax y la porción superior del abdomen.

Gasometría arterial: Sirve para identificar si hay una suficiente cantidad de oxígeno en sangre en los pulmones.

Conteo sanguíneo completo para verificar el conteo de glóbulos blancos.

Bibliografía:

Lifshitz Alisa. Neumonía. Pulmonía. Vida y salud. [actualizada en 2012, acceso el 06 de Mayo de 2017]. Disponible en: http://www.vidaysalud.com/salud-de-a-a-z/enfermedades-y-condiciones/neumonia-pulmonia/

Chow Susan. Diagnosis de la neumonía. News Medical Lifescience [actualizada en 11 de octubre de 2015, acceso el 06 de Mayo de 2017]. Disponible en: http://www.news-medical.net/health/Pneumonia-Diagnosis-%28Spanish%29.aspx

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