Prueba de PCR en neumonía

Tema: Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad

Objetivo: La detección simultánea, mediante métodos moleculares, a M. pneumoniae, C. pneumoniae y L. pneumophila en muestras respiratorias de pacientes con neumonía adquirida en la comunidad, y describir los gérmenes comunes aislados por métodos microbiológicos convencionales

Muestra: Esputo, secreción faríngea y lavado broncoalveolar 

Tipo de ácido nucleico a ser extraído: ADN bacteriano

Extracción de ADN:

• Lisis: Kit comercial Wizard Genomics
• Purificación: Kit comercial Wizard Genomics
• Separación: Kit comercial Wizard Genomics

Genes a amplificar: OMP o la proteína 60-kDa16S, rRNA.

Número de pares de bases: 352 pares de bases en M. pneumoniae, 333 pares de bases en C. pneumoniae y 233 pares de bases en L. pneumophila.

Tipo de PCR: PCR Múltiple

Visualización: Electroforesis

• Desnaturalización: Técnica de Mejuto y colaboradores
• Hibridación: 55°C y la Técnica de Mejuto y colaboradores
• Extensión: Técnica de Mejuto y colaboradores
• Numero de ciclos: Técnica de Mejuto y colaboradores

Bibliografía: 

Guillén R., Franco R., Franco L., Moraga P., Ojeda M., Russomando. Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad que concurrieron al INERAM. SCielo. (actualizado en Junio de 2012; acceso el 13 de Mayo de 2017) Disponible en: http://scielo.iics.una.py/scielo.php?pid=S1812-95282012000100004&script=sci_arttext

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